细胞毒性是由细胞或者化学物质所引起的单纯的细胞杀伤事件,不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理.有时需要进行特定物质细胞毒性的检测,比如药物筛选.细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测,细胞毒性是化学物质作用于细胞基本结构和生理过程。下面由微谱检查机构和大家一起来了解下关于细胞毒性实验检测方法的内容。
细胞毒性实验检测方法
一、MTT、XTT法:利用线粒体内酶的活性,可以将特定的四唑盐类进行转化,然后通过酶标仪来进行检测。
其它酶方法:可检测上清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性等细胞增殖能力。分析试剂原理:正常细胞代谢旺盛,其线粒体内的琥珀酸脱氢酶,可以将四唑盐类物质还原为紫色的结晶状的物质,沉积在细胞周围,然后通过酶标仪读取OD值,从而检测到细胞增值状态。
LDH的方法:通过检测细胞培养上清中LDH的酶活性,来检测细胞毒性。
二、LDH法细胞毒性检测原理:LDH(乳酸脱氢酶)是一种稳定的蛋白质,存在于正常细胞的胞质中,一旦细胞膜受损,LDH就会被释放到细胞外;LDH催化乳酸形成丙酮酸盐,和INT反应形成紫色的结晶物质,可通过500nm酶标仪进行检测。通过检测细胞培养上清中LDH的活性,即可判断细胞受损的程度。
三、荧光素发光法
细胞生存能力检测原理:腺苷酸激酶(AK)存在于所有真核细胞和原核细胞的胞浆中,AK具有激活ADP生成ATP的能力。当细胞受损后,细胞膜发生破损,AK会释放到培养上清中。该试剂盒利用荧光素酶和荧光素在ATP作用下可以发光,通过化学发光仪可以定量进行检测。
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